ELISA檢測細胞自噬，下一個hot spot
自噬（autophagy）是由 Ashford 和 Porter 在 1962 年發現細胞內有“自己 吃自己”的現象后提出的，是指從粗面內質網的無核糖體附著區脫落的雙層膜 包 裹 部 分 胞 質 和 細 胞 內 需 降 解 的 細 胞 器 、 蛋 白 質 等 成 分 形 成 自 噬 體 （autophagosome），并與溶酶體融合形成自噬溶酶體，降解其所包裹的內容物， 以實現細胞本身的代謝需要和某些細胞器的更新。自噬是繼凋亡（apoptosis）后， 當前生命科學最熱的研究領域之一，根據 Pubmed 記錄的文獻數量，2006 年以 前其相關文獻大約 1500 條。2007 年至 2010 年 9 月其相關文獻發表量達到大約 4400 條。
但是，關于自噬的檢測，一直是研究者們頭痛的一個問題。細胞自噬的金 標準是在電鏡下觀察到被稱為 Phagophore 的吞噬泡，如圖 1 所示，在自噬不同 時期可觀察到不同形態的吞噬泡。雖然電鏡可直接觀察到自噬，但由于需要電 鏡設備和一定的實驗技能，其無法滿足所有研究者的需要。因此，常規還可利 用 LC3 的抗體，通過 Western Blot 檢測 LC3-II/I 比值的變化以評價自噬的發生發 展。當自噬形成時，胞漿型 LC3 會酶解掉一小段多肽形成 LC3-I，LC3-I 跟 PE 結合轉變為（自噬體）膜型（即 LC3-II）。
圖 1. 透射電鏡下觀察不同時期的自噬泡 (源引自：Madame Curie Bioscience Database)
除此之外，GFP-LC3 單熒光體系和 mRFP-GFP-LC3 雙熒光體系也廣泛應用 于自噬檢測中。通過轉染或感染等方法，研究者可將 GFP-LC3 表達于目標細胞 中，再通過熒光顯微鏡下觀察 GFP 的數量、強弱等來對細胞的自噬形成來進行 檢測。
隨著近年來酶聯免疫吸附測定法 (Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay , ELISA)技術的發展，研究者們發現通過 ELISA 的方法檢測自噬相關基因，也可 很方便地對細胞的自噬情況進行評價。自噬相關基因(autophagy associated gene, ATG)，顧名思義，是指直接參與或調節自噬相關過程的基因，目前已發現 的 ATG 有 16 種，命名從 ATG1-ATG16，其中 ATG8 也被稱為 LC3，ATG6 也被 稱為 Beclin-1。 Cloud-Clone Corp.據此開發一系列的 ATG 蛋白檢測試劑盒，包 括 ATG12 檢測試劑盒（SEL224Hu）、ATG16L1 檢測試劑盒（SEN942Hu）、 ATG5 檢測試劑盒（SEL221Hu）、ATG7 檢測試劑盒（SEL222Hu）、BECN1 檢測試劑盒（SEN942Hu）、ATG16L1 檢測試劑盒（SEN942Hu）、ATG16L1 檢測試劑盒（SEJ557Hu）等。這些產品均為科研用戶研究自噬相關機制提供了 良好的實驗平臺。
與其它檢測手段相比，ELISA 檢測細胞自噬具有簡便、省時、無需電鏡或 熒光顯微鏡等大型儀器、可同時檢測多個樣品等優點，為研究自噬的機理提供 了更方便的產品支持。
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