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        ELISA實驗樣本測值低原因分析和建議解決方案

        ELISA實驗樣本測值低原因分析和建議解決方案

         

        ELISA 實驗中,實驗者經常會遇到樣本測值低的問題,針對這一問題,分析了可能原因和解決方法。

        分析原因

        解決方法

        試劑盒保存不當,導致試劑部分或完全失效。

        請按說明書要求保存試劑盒。檢測液 A、檢測液 B、標準品以及酶標條等儲存在-20 oC,而其它試劑需儲存在 4 oC。

        樣本反復凍融,樣本反復凍融會導致樣本中蛋白降解。

        收集樣本制備后,需進行分裝后凍存-20oC或-80oC,避免樣本反復凍融。

        樣本保存不當或保存時間過長。長時間的儲存有可能導致目標蛋白的降解, 致使檢測結果不理想。

        建議使用新鮮的樣本。標本均需密封保存,4oC 保存小于 1 周,-20oC 不超過 1 個月,-80oC 不超過 2 個月。

        樣本稀釋過度以及稀釋不足均有可能導致樣本的測值低。稀釋過度,導致樣本中靶分子含量太低而出現測值低現象;稀釋不足,樣本中抗原過量會出現后帶效應。當樣本中目標物含 量很高,而沒有進行正確的稀釋,就有可能會導致假陰性反應。

        血清血漿樣本可參考試劑盒推薦的稀釋倍數進行實驗。其它生物樣本,樣本收集和制備過程中影響因素太多,建議做預實驗確定樣本稀釋倍數。可參考文獻,將樣本進行梯度稀釋,最后選取樣本 O.D.值落在標準曲線中間位置的 點的稀釋倍數。

        分析物在樣品中本身濃度偏低。大多數細胞因子在正常情況下表達量很低,如 IL-6 需在炎癥刺激情況才會大量產生,一般非炎癥樣本或未刺激處理樣本測值會非常低。

        建議根據文獻選取適合的刺激方案。對于這些細胞因子,云克隆除了驗證血清血漿樣本(多數陰性),也會驗證未處理的細胞上清(多數陰性)和刺激處理后細胞上清樣本(陽性樣本)。而且云克隆推出了高敏試劑盒,以提高樣本中細胞因子的檢出率。


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