乳腺癌研究新進展——名為PDPN的幫兇
Massimiliano Mazzone研究團隊在《Cell Metabolism》上發表的最新研究進展表明：表達Podoplanin（PDPN）的巨噬細胞能夠促進乳腺癌的淋巴管生成和轉移，為研究乳腺癌的發生發展提供了新的思路。
研究發現：PDPN參與腫瘤相關的巨噬細胞（TAMs）與淋巴管內皮細胞（LEC）的粘附。從機制上講，PDPN與LEC來源的galectin 8（GAL8）的結合，促使Integrin b1被激活。當接近淋巴管時，表達PDPN的TAM亞群（又名PoEMs），刺激局部基質重塑并促進血管生長和淋巴侵襲。小鼠模型表明去除PoEMs或抑制galectin 8的作用可抑制乳腺癌細胞的轉移，又進一步證實了PoEMs與乳腺癌的臨床相關性。
具體研究過程和結論如下：
PoEMs促進基質轉換和轉移：
研究人員以乳腺癌細胞系4T1作為載體，發現PDPN特異性的高表達于TAM。那么，PDPN+ TAMs（即PoEMs）以及PDPN- TAMs（即non-PoEMs）在腫瘤中的表達空間分布是否會有差異呢？通過組織學的檢測，發現PoEMs更多的分布在靠近淋巴管或黏附在淋巴管的位置。Gene ontology富集分析發現PoEMs的高表達與細胞外基質重塑和重組密切相關，但與細胞因子和生長因子的相關性卻不大。
PDPN促進腫瘤淋巴管生長和轉移：
那么，PDPN高表達發揮了什么樣的生物學功能呢？研究人員以WT→WT和PDPN KO→WT小鼠對照，比較淋巴管總面積、管腔大小，發現PDPN KO→WT小鼠相對于對照組顯著降低，同時發現CK14+的乳腺癌細胞明顯減少。切除淋巴結后植入4T1乳腺癌細胞，選用肺轉移作為評估對象，比較淋巴擴散的速度，發現淋巴結切除的WT→WT小鼠肺轉移明顯減少，而PDPN KO→WT小鼠幾乎沒有出現肺轉移。也就是說，PDPN促進了腫瘤的轉移。
以上數據可以看出，PoEMs促進腫瘤淋巴管生成和淋巴轉移，并有利于癌細胞進入淋巴循環。
GAL8是乳腺癌轉移和進展的關鍵因素：
GAL8是一種由淋巴管大量表達的分泌性糖結合蛋白，參與調節細胞粘附和遷移，是公認的可作用于PDPN的一種物質。在4T1的腫瘤切片中觀察到GAL8表達于腫瘤淋巴管和一些CD45+免疫細胞卻并不表達于腫瘤血管。并比較GAL8與PDPN WT 及PDPN KO骨髓來源巨噬細胞（BMDMs）的結合能力，發現PDPN缺失之后GAL8的結合能力明顯受影響。當檢測巨噬細胞的遷移能力的時候，又發現PDPN缺失之后，巨噬細胞的遷移能力會完全喪失，進一步檢測發現PDPN的缺失也會影響BMDMs向淋巴內皮細胞（LECs）遷移。研究團隊進一步驗證GAL8對TAMs的作用，以腫瘤淋巴管特異性GAL8條件性敲除小鼠作為研究對象，發現：
1. CD45+免疫細胞仍會表達GAL8；
2. 腫瘤淋巴管的區域明顯減少；
3. TAMs向淋巴管的遷移能力明顯降低；
4. 肺轉移明顯減少。
除此之外，PoEMs的遷移和黏附也依賴于GAL8介導的Integrin b1的激活。
我們注意到，在Confocal實驗中用到的抗小鼠GAL8抗體來自于云克隆公司。不得不說，云克隆公司除了ELISA試劑盒之外，抗體也逐漸被大家所認可。
PDPN參與腫瘤微環境基質重塑：
假設PDPN參與了某些基因上游的轉錄調控，隨機選取前100個上調型轉錄子，發現其中4個基質金屬蛋白酶（Mmp2，Mmp9，Mmp12和 Mmp13）和8個膠原蛋白（Col1a1, Col1a2, Col3a1, Col5a2, Col5a3, Col5a1, Col6a2和 Col6a3）在PoEMs中明顯上調。有趣的是，靠近腫瘤淋巴管的一群PoEMs大量表達Col1a1和Col1a2，在4T1的組織學檢測中，也發現PODN的敲除會減少膠原蛋白的表達。研究發現PDPN不僅僅只是單純的促進TAMs向腫瘤淋巴管遷移，還會通過基質重塑大大促進腫瘤淋巴結的生長。
PoEMs與乳腺癌的臨床相關性：
以上的研究為人乳腺癌的研究提供了有力的證據，將以上研究結論應用于乳腺癌患者，進一步的研究發現：
1. 人的PoEMs向分泌型GAL8遷移，而non-PoEMs卻并不會；
2. 人PDPN+的單核巨噬細胞向LECs遷移的能力比PDPN-巨噬細胞更強，并且如果沉默表達GAL8的目的基因，該遷移能力將會喪失；
3. 乳腺癌患者有淋巴結和器官轉移時，PoEMs的數量會明顯增多；
4. 乳腺癌患者的GAL8表達于腫瘤淋巴管和一些浸潤的免疫細胞，而不表達于腫瘤血管。
從目前來看，PoEMs可促進小鼠和人乳腺癌淋巴管生成和淋巴播散，而對于其他腫瘤是否有著類似的作用仍然有待研究，該研究為今后其他腫瘤研究提供了新思路。該研究也再次向我們展示了免疫細胞的特性與它們所處微環境的密切聯系。
非常感謝研究人員對云克隆產品的信任，未來的道路仍然任重道遠，但有大家的支持，我們相信我們會越做越好。