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        兒茶酚-O-甲基轉移酶(COMT)活性蛋白

        兒茶酚-O-甲基轉移酶(COMT)活性蛋白


        兒茶酚-O-甲基轉移酶(COMT)是幾種降解兒茶酚胺(如多巴胺、腎上腺素和去甲腎上腺素)、兒茶膽固醇以及具有兒茶酚結構的各種藥物和物質的酶之一。COMT有兩種亞型:可溶性短型(S-COMT)和膜結合長型(MB-COMT)。COMT在內源性兒茶酚胺神經遞質、兒茶酚雌激素和異生分子的分解代謝中起重要作用。其通過向兒茶酚胺引入一個甲基,而導致兒茶酚胺神經遞質(多巴胺、腎上腺素和去甲腎上腺素)的失活。兒茶酚胺甲基化的供體是S-腺苷甲硫氨酸(SAM)。任何具有兒茶酚結構的化合物,如兒茶膽固醇和含有兒茶酚的類黃酮,都是COMT的底物。此外,UDP葡萄糖醛酸轉移酶2家族多肽B1(UGT2B1)已被鑒定為COMT的相互作用因子,因此采用結合ELISA法檢測重組人COMT與重組人UGT2B1的相互作用。


        實驗目的: UDP葡萄糖醛酸轉移酶2家族多肽B1(UGT2B1)被鑒定為COMT的相互作用因子,因此采用ELISA法檢測重組人COMT與重組人UDP葡萄糖醛酸轉移酶2家族多肽B1(UGT2B1)的相互作用。


        實驗步驟: 用含有0.01%BSA的PBS(pH 7.4)梯度稀釋COMT。將100uL樣本移入UGT2B1蛋白預包被的酶標板中,37℃反應2小時。棄去孔內液體,用PBST洗板3次。加入抗COMT的pAb后孵育1小時,棄去孔內液體,用PBST洗板3次。再加入HRP標記的二抗孵育后,棄去孔內液體,用PBST洗板3次。加入底物溶液,在37℃孵育15-25分鐘。最后,向孔中加入50μL終止液,并立即在450nm下讀數。 


        實驗結果: COMT與UGT2B1的結合活性如Figure 1所示。

        實驗結論: COMT可與UGT2B1結合,且這種作用呈劑量依賴性。 


        云克隆兒茶酚-O-甲基轉移酶(COMT)活性蛋白貨號:APJ365Hu01


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