神經氨酸酶(NEU)活性蛋白
神經氨酸酶（Neuraminidase，NEU）是一種能分解（切斷）神經氨酸糖苷鍵的糖苷水解酶。人類基因組中發現至少4種哺乳動物唾液酸酯酶同源物（見NEU1、NEU2、NEU3、NEU4）。體內缺乏神經氨酸酶，導致低聚糖在體內細胞中貯積，會引發唾液酸貯積癥。在細胞內，組織蛋白酶A（Cathepsin A，CTSA）殘基在溶酶體內與β-半乳糖苷酶（Galactosidase Beta，GLb）和神經氨酸酶NEU組成高分子量復合物。CTSA與這些糖苷酶的相互作用對它們進入溶酶體的正確途徑是必須的，并防止它們發生溶酶體內水解。
實驗原理：神經氨酸酶NEU可與CTSA結合。本實驗通過結合ELISA檢測重組人NEU和重組CTSA蛋白的相互作用。
實驗方法：用含有0.01% BSA的PBS（pH 7.4）梯度稀釋NEU。將100μL樣品移入CTSA蛋白預包被酶標板中，37℃孵育2小時。棄去孔內液體，用PBST洗滌。除去洗液，加入抗NEU-pAb孵育1小時，棄去孔內液體，用PBST洗板3次。用辣根過氧化物酶標記的二抗孵育后，棄去孔內液體，用PBST洗板3次。加入底物溶液后，在37℃下孵育15-25分鐘。最后，向孔中加入50μL終止液，立即用酶標儀在450nm波長測量各孔的光密度。
實驗結果：NEU和CTSA的結合活性如Figure 1所示，結合活性呈劑量依賴性。
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APB611Hu02 Active Neuraminidase (NEU)