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        神經氨酸酶(NEU)活性蛋白

        神經氨酸酶(Neuraminidase,NEU)是一種能分解(切斷)神經氨酸糖苷鍵的糖苷水解酶。人類基因組中發現至少4種哺乳動物唾液酸酯酶同源物(見NEU1、NEU2、NEU3、NEU4)。體內缺乏神經氨酸酶,導致低聚糖在體內細胞中貯積,會引發唾液酸貯積癥。在細胞內,組織蛋白酶A(Cathepsin A,CTSA)殘基在溶酶體內與β-半乳糖苷酶(Galactosidase Beta,GLb)和神經氨酸酶NEU組成高分子量復合物。CTSA與這些糖苷酶的相互作用對它們進入溶酶體的正確途徑是必須的,并防止它們發生溶酶體內水解。


        實驗原理:神經氨酸酶NEU可與CTSA結合。本實驗通過結合ELISA檢測重組人NEU和重組CTSA蛋白的相互作用。


        實驗方法:用含有0.01% BSA的PBS(pH 7.4)梯度稀釋NEU。將100μL樣品移入CTSA蛋白預包被酶標板中,37℃孵育2小時。棄去孔內液體,用PBST洗滌。除去洗液,加入抗NEU-pAb孵育1小時,棄去孔內液體,用PBST洗板3次。用辣根過氧化物酶標記的二抗孵育后,棄去孔內液體,用PBST洗板3次。加入底物溶液后,在37℃下孵育15-25分鐘。最后,向孔中加入50μL終止液,立即用酶標儀在450nm波長測量各孔的光密度。

         

        實驗結果:NEU和CTSA的結合活性如Figure 1所示,結合活性呈劑量依賴性。


        云克隆產品

        APB611Hu02  Active Neuraminidase (NEU)


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