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        • 肌酸激酶B(CK-BB)活性蛋白

          實驗原理:肌酸激酶BB(CK-BB)是一種肌酸激酶。CK-BB由兩個完全相同的腦型CKB亞單位組成的同二聚體,是一種參與細胞能量穩態的細胞質酶,其某些部分與細胞膜、ATP酶和細胞內多種需要ATP的酶結合。此外,肌酸激酶M(CKM)已被鑒定為CKB的相互作用因子。本實驗通過結合ELISA檢測重組人CK-BB和重組人CKM的相互作用。實驗試劑:APC030Hu01 Active Creatine Kinase B (CK-BB)實驗方法:用含有0.01% BSA的PBS(pH 7.4)梯度稀釋CK-BB。將100μL樣品移入CKM蛋白預包被酶標板中,37℃孵育2小時。棄去孔內液體,用PBST洗滌。除去洗液,加入抗CK-BB......

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        • 過敏毒素C5a活性蛋白

          過敏毒素C5a是補體系統的組成部分,能夠促進中性粒細胞和單核細胞向血管壁的遷移及粘附。C5a可誘導THP-1細胞趨化遷移。因此,采用24孔細胞遷移/趨化分析系統,檢測C5a對人單核細胞株THP-1的趨化作用。實驗步驟:將THP-1細胞接種到趨化小室的上室(100μL細胞懸浮液,10^6個細胞/mL重置于含有0.5%FBS的RPMI 1640中),將重組過敏毒素C5a(用無血清RPMI 1640分別稀釋至50ng/mL和100ng/mL)加入趨化小室的下室。上室和下室使用聚碳酸酯過濾器(8μm孔徑)分隔。由于聚碳酸酯膜有通透性,下層培養液中的成分可以影響到上室內的細胞,從而......

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        • 鐵調素(Hepc)活性蛋白

          鐵調素(Hepcidin,Hepc)是鐵代謝的調節因子。Hepcidin通過與位于腸道腸上皮細胞基底外側表面和網狀內皮細胞(巨噬細胞)質膜上的膜鐵轉運蛋白(ferroportin,FPN)結合來抑制鐵離子的轉運。Hepc最終分解溶酶體中的轉運蛋白,抑制FPN而阻止鐵離子的輸出,鐵離子被隔離在細胞中。實驗目的FPN已被鑒定為Hepc的相互作用因子,因此采用結合ELISA法檢測重組人Hepc與重組人FPN的相互作用。實驗步驟:用含有0.01%BSA的PBS(pH 7.4)梯度稀釋Hepc。將100uL樣本移入FPN蛋白預包被的酶標板中,37℃反應2小時。棄去孔內液體,用PBST洗板3次。加......

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        • 活性蛋白單核細胞趨化蛋白1的趨化作用

          單核細胞趨化蛋白1(Active Monocyte Chemotactic Protein 1,MCP-1),也稱為CCL2,屬于趨化細胞因子家族。MCP-1已被證明能夠誘導THP-1細胞的趨化性遷移。因此,本實驗采用趨化性試驗檢測其MCP-1蛋白對THP-1細胞的趨化作用。將100uL THP-1細胞懸液接種于培養小室上室,不同濃度的MCP-1蛋白(25 ng/mL和50 ng/mL)置于培養小室下室,37℃孵育3h,去除濾膜并在倒置顯微鏡下觀察并計數細胞遷移數。顯微鏡下觀察遷移的THP-1細胞如下圖:圖1. MCP-1對THP-1細胞的趨化作用A.50ng/mL MCP-1蛋白對THP-1細胞的趨化作用;B.25ng/mL MCP-1蛋白......

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        • 活性蛋白巨噬細胞炎性蛋白1β的促趨化作用

          巨噬細胞炎性蛋白1β(Macrophage Inflammatory Protein 1 Beta, MIP-1β),又稱CCL4,主要與CCR5受體特異性結合的趨化因子,能特異性趨化淋巴細胞、單核細胞向炎癥部位遷移。本實驗通過檢測MIP-1β對人急性T細胞白血病細胞系Jurkat的趨化作用來評估人重組MIP-1β蛋白的活性。實驗方案:將100uLJurkat細胞懸液(5×105cells/mL in RPMI 1640 with FBSfree)鋪板與培養小室上室,不同濃度的人重組MIP-1β蛋白(0.0001ng/mL, 0.001ng/mL, 0.1ng/mL, 1ng/mL, 10ng/mL, 100ng/mL diluted separately in serum free RPMI 1640)置于培養小室下......

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        • 活性蛋白IL2的促細胞增殖作用

          白介素2(IL2)的產生主要由T細胞受抗原或絲裂原刺激后合成,IL2在調節T細胞和B細胞的增殖中發揮著至關重要的作用。人IL2和小鼠IL2氨基酸序列的同源性是56%,提示其可能存在交叉性。因此,為了檢測人重組蛋白IL2的生物學活性,我們選用小鼠CTLL-2細胞來進行細胞的增殖實驗。實驗方案:將CTLL-2細胞以5000個細胞每孔的細胞密度接種到96孔板中,并添加不同濃度的人重組IL2蛋白。孵育48h后,用倒置顯微鏡觀察細胞,用CCK-8細胞計數試劑盒(cell Counting Kit-8)檢測細胞增殖情況。實驗結果: ......

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        • 淺談大鼠心肌細胞原代細胞的制備

          心肌細胞培養作為一種體外研究模型,可以更便捷的從細胞和分子水平對其生長、發育、生理、代謝、病理等進行研究。在許多研究領域原代培養心肌細胞作為一種主要的研究模型,被廣泛應用于心血管研究之中。武漢云克隆動物有限公司憑借多年的實踐經驗總結了一些大鼠心肌原代細胞的處理方法,給大家分享:1 大鼠的選擇新生大鼠鼠齡的選擇新生大鼠心肌細胞在出生后3 d內具有部分的增殖能力,成年大鼠心肌細胞則為終末分化細胞,不再具有分裂增殖能力。因此,大鼠出生時間越短,其心肌細胞分離后成活率越高,越容易貼壁生長。大量觀測表明......

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        • 基質金屬蛋白酶13活性實驗

          基質金屬蛋白酶(Matrix Metalloproteinase)是一組具有多種共同生化性質的可以降解細胞外基質的酶,它們參與正常生命過程中結締組織的再造?;|金屬蛋白酶的降解作用在中性pH條件進行,需要有內在的Zn2+離子和外在的Ca2+離子存在;且酶活能被螯合劑和金屬蛋白酶的組織抑制因子(Tissue Inhinbitor of Metalloproteinase,TIMP)所抑制。 基質金屬蛋白酶13(MMP13)是基質金屬蛋白酶家族的成員,研究表明MMP13參與與骨關節炎相關的聚集蛋白聚糖降解,骨關節炎軟骨移植物中II型膠原蛋白的裂解,以及腫瘤的進展和轉移。另外,MMP1......

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        色亚洲五月天
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