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        • 蛋白活性實驗-細胞遷移侵襲實驗

          細胞transwell 遷移侵襲實驗方案一、實驗目的:主要用于趨化因子家族或者某些補體以及某些具有趨化活性的蛋白活性檢測。二、實驗儀器:倒置顯微鏡酶標儀 超凈工作臺 CO2培養箱三、相關試劑、耗材:24孔transwell小室 胎牛血清 DMEM/1640培養基 結晶紫 基質膠 四、實驗步驟:A. 細胞遷移1 . 將細胞消化,終止后離心棄去培養液,用 PBS 洗 1-2 遍,用無血清培養基重懸。調整細胞密度至 1~5×105左右,每孔100-200μl加入小室上室中。2.下室加入用無血清培養基按5-10倍梯度稀釋的待檢測蛋白,每孔500μl。對于貼壁細胞,下室可加入含1-2% ......

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        • 蛋白質印跡(Western Blot)實驗操作流程

          1.制膠1)試劑濃縮膠緩沖液:1M Tris-HCl, pH 6.8, 0.4% SDS分離膠緩沖液:1.5M Tris-HCl, pH 8.8, 0.4% SDS丙烯酰胺儲存液:29%丙烯酰胺+1.0%亞甲雙丙烯酰胺10%過硫酸銨TEMED(N,N,N‘,N’-四亞甲基乙二胺)電泳緩沖液:0.025M Tris Base, 0.192M Glycine, 0.1% SDS考馬斯亮藍凝膠染色液:0.2%考馬斯亮藍R-250,30%甲醇,10%乙酸考馬斯亮藍凝膠脫色液:30%甲醇,10%乙酸2)設備微型凝膠裝置:Bio-Rad Mini-Protean 3 Dodeca Cell電源:Bio-Rad PowerPac HC梯度凝膠儀:Bio-Rad Model 485 Gradient Former3)實驗操作在燒杯中按如下......

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        • 酶聯免疫吸附測定實驗(ELISA)常見樣本處理方法

          酶聯免疫吸附測定實驗(ELISA)是一種快速、靈敏、準確可靠的定量分析方法,樣本的處理對于ELISA實驗的成功有著舉足輕重的作用。剛開始接觸ELISA的時候,會遇到一些棘手的問題,容易導致實驗出現這樣那樣的狀況。用于ELISA檢測的常見樣本類型包括血液(血清、血漿),組織勻漿、細胞裂解液、細胞培養上清等。這些樣本的收集時間、處理方法和保存方式都會影響ELISA實驗的結果。下面我們將逐一介紹常見的樣本處理方法,供研究者參考。一、血液樣本血液采取后應盡快進行處理,使血清(漿)從與血細胞接觸的全血中分離出來。血清與血漿......

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        • 實時熒光定量PCR實驗操作流程

          一、實驗器材及試劑1、實驗器材多樣品研磨珠均質儀臺式高速冷凍型微量離心機熒光定量PCR儀超凈工作臺分光光度計離心管TIP頭2、主要實驗試劑及耗材RNA提取液三氯甲烷異丙醇無水乙醇HyPure TMMolecular Biology Grade WaterRevertAid First Strand cDNA Synthesis KitFastStart Universal SYBR Green Master(Rox)引物75%乙醇:HyPure TMMolecular Biology Grade Water配制離心管、TIP頭均購濕熱滅菌40min,干燥。二、熒光定量PCR實驗步驟1、總RNA抽提(槍頭和離心管均經過濕熱滅菌,無RNA酶)1)取勻漿器,加入1ml的Trizol Reagent,......

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        • 蛋白活性實驗-細胞增殖/抑制實驗方案

          細胞增殖/抑制實驗方案一、實驗目的:通過檢測待測蛋白對某種細胞的有促進增殖或抑制增殖的作用來評價該蛋白的生物活性。二、實驗儀器:倒置顯微鏡酶標儀 超凈工作臺 CO2培養箱三、相關試劑、耗材:96孔細胞培養板 胎牛血清 DMEM/1640培養基 CCK8試劑盒四、實驗步驟:1 .將待測細胞消化后,用10% DMEM/1640培養基重懸稀釋,按2000-5000 cells/孔接種到96孔板中,每孔100μl??筛鶕毎陨砩L狀態適當調整接種濃度,抑制實驗可多接種一些。當細胞貼壁后,換無血清的DMEM/1640饑餓過夜。2.將孔內無血清培養基吸出棄掉,加入用低濃度......

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        • 免疫層析(膠體金)實驗操作流程

          1. 膠體金標記抗體的制備。將檢測抗體加入到膠體金溶液中,攪拌均勻,靜置0.5-24小時,逐滴加入牛血清蛋白,攪拌0.5-24h,靜置過夜。離心,棄去上清液。得到膠體金標記抗體。2. 噴金。將膠體金標記抗體噴在結合墊上,37oC抽風烘干5-24h,得到噴金后的結合墊。3. 包被C線。C線即是質控線,用二抗包被。4. 包被T線。T線是檢測線,用包被抗體包被。37oC抽風烘干2-24h, 得到包被后的硝酸纖維素膜,浸泡在封閉液中,37oC抽風烘干2-24h。5. 組裝。將聚氯乙烯底板、樣品墊、步驟2.2所得噴金后的結合墊、步驟3&4處理好的硝酸纖維素膜和......

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        • 雙抗夾心ELISA實驗操作流程

          1. 酶標板包被抗體流程:1.1按說明書推薦的比例稀釋包被抗體,或者設計預實驗用倍比稀釋的方式稀釋包被抗體,酶標孔中加100ul包被抗體包被。酶標板加上覆膜,4oC溫育過夜或37oC溫育2小時。1.2棄去孔內液體,每孔用350μL的洗滌液洗滌,浸泡1-2分鐘。在吸水紙上輕拍酶標板來移除孔內所有液體。此過程也可采用噴射瓶,多道移液器 或自動洗板機來完成。1.3每孔加入200ul封閉液封閉,37oC溫育1.5小時。1.4 棄去孔內液體,甩干,洗板1次,方法同步驟1.2。酶標板包被抗體完成。2. 實驗流程2.1按說明書推薦的方法稀釋成不同濃度的標準品工作......

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        • 免疫組織化學石蠟切片實驗操作流程

          1. 烘片:60℃烘片0.5-2小時。2. 脫蠟水化:烘片結束后,石蠟切片依次置于以下試劑中:1)二甲苯I:30 min2)二甲苯II:30 min3)100%乙醇:10 min4)95%乙醇:10 min5)80%乙醇:10 min6)70%乙醇:10 min7)自來水沖洗10 min3. 抗原修復-微波爐抗原熱修復法(可選):將組織切片轉移到沸騰的EDTA-Tris 溶液中使其完全浸透。低火加熱一分鐘,停止加熱并靜置于微波爐中10min。然后再低火加熱3-4分鐘,停止加熱,使EDTA-Tris 溶液在室溫自然冷卻。4. PBST漂洗3次:去除殘留并浸泡在PBST中,在搖床中以40 RPM漂洗5 min,重復3次。5. 阻......

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        色亚洲五月天
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