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        • 雞能生“金蛋”嗎?云克隆有好辦法!

          雞可以生“金蛋”嗎?似乎雞生金蛋只出現在童話故事中。而云克隆新研發的雞抗制備技術,讓母雞“生”出比黃金貴得多的“抗體”蛋??贵w,作為生命科學研究中最常用的“示蹤劑”,通常市價是黃金的100-1000倍。1克黃金的價格在300元左右,而0.1克抗體的售價為1000到2000元左右。一只“抗體”蛋蛋黃中含有大約0.3g抗體。這就是云克隆的生“金蛋”雞??贵w的制備最常用的動物是兔,但是兔與人、大鼠、小鼠等物種均屬于哺乳類動物,雖然大部分的蛋白差異是較大的,但是總有一些如“管家基因”編碼的蛋白在各種哺乳動物中是極相似的,這些蛋白,由于結......

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        • 慢病毒和腺病毒表達系統

          借助于病毒顆粒作為基因的載體,利用病毒的侵染特性,自發的侵染哺乳動物細胞,將目的基因導入哺乳動物細胞中,以完成目的產物的超量表達或干涉。該技術目前在基因、小RNA、轉錄因子等功能驗證領域以及重組蛋白表達、轉基因哺乳動物制備等領域作為一種主要的技術手段被廣泛使用。該技術體系主要由病毒包裝和病毒侵染篩選兩個部分組成(如圖所示)。病毒包裝就是借助基因工程的方法將目的基因片段與人為改造病毒的基因組通過特殊的位點連接起來形成重組病毒基因組以及重組病毒制備的過程,常規使用的病毒包裝系統有慢病毒包裝系統和......

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        • 蛋白/抗體的常用標記方法介紹

          為研究蛋白的性質、含量、結構與功能,以及為了方便對抗原抗體特異性結合的實驗現象進行觀察和檢測,通常會選擇利用一些易測定又具有高度敏感性的物質作為標記物標記抗原,然后通過檢測這些標記物的增強放大效應而產生的顏色變化、光譜變化等來達到研究目的。即利用抗原中氨基酸殘基的特殊理化性質,在特定的條件下使蛋白/抗體與標記物結合,形成蛋白/抗體標記物。標記抗原原理示意圖如下:標記蛋白一般可采用酶標記、生物素標記、熒光標記以及C13和N15全蛋白標記等方式。標記抗體一般可采用酶標記、生物素標記、熒光標記以及膠體金......

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        • 熒光抗體染料大集合

          染料在生物化學中最早的應用是直接對切片進行染色,然后進行觀察。隨著生物技術、計算機技術以及熒光光譜測定技術的不斷發展,許多染料尤其是熒光染料在細胞檢測、腫瘤基因蛋白分析、毒物分析、臨床醫療診斷等方面得到了廣泛的應用。熒光染料泛指吸收某一波長的光波后能發射出另一大于吸收光波長的光波的物質。利用熒光染料進行抗體標記分析在現代生物免疫學領域中應用廣泛,并逐步顯示出明顯的優越性。下面簡要介紹應用于標記抗體的熒光染料及其種類:1. 熒光素類染料,包括異硫氰酸熒光素(FITC)、 羥基熒光素(FAM)、四氯熒光素(TE......

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        • 昆蟲細胞表達系統

          昆蟲細胞表達系統是四大表達系統(昆蟲細胞、細菌、酵母、哺乳動物細胞表達系統)之一。昆蟲細胞表達系統原理是通過轉座作用將轉移載體中的表達組件定點轉座到能在大腸桿菌中增殖的桿狀病毒穿梭載體(Bacmid)上,通過抗性和藍白斑篩選到重組穿梭質粒,提取穿梭質粒DNA轉染昆蟲細胞后,得到的子代病毒即為重組病毒。將病毒上清浸染昆蟲細胞,獲得表達的重組蛋白。桿狀病毒是一類閉合環狀雙鏈病毒,病毒粒子呈桿狀,以昆蟲為主要宿主。桿狀病毒還是一種出芽型分泌性病毒粒子,在感染細胞后能迅速在培養細胞中水平傳播而保持細胞在相......

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        • 小分子半抗原之載體偶聯II

          在上期專題中我們講到小分子半抗原的結構修飾,這期我們將展開講述載體蛋白的選擇以及偶聯方法。載體蛋白是一種自身就能引發免疫反應的大分子,許多不同種類的載體蛋白與小分子偶聯后可制備成完全的抗原。常用的載體包括牛血清白蛋白、鑰孔血藍蛋白、卵清蛋白、牛甲狀腺球蛋白等。對于載體蛋白的選擇,主要涉及其溶解性、大小、偶聯基團、免疫原性、成本價格等因素。目前市面上應用最為廣泛的是牛血清白蛋白BSA(三維結構如圖1),主要是由于BSA化學性質穩定,不易變性,分子內含有多種氨基,且賴氨酸含量高,廉價易得。但BSA由于在一......

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        • 小分子半抗原之結構修飾

          要制備小分子半抗原的抗體,首先對小分子的結構有一定的要求,需要一定的復雜性或剛性,如含有苯環、雜環基團或者有分支結構,否則難以產生抗體或產生的抗體效價也較低。一些小分子半抗原若具有活性基團,如-COOH、-NH2、-OH等,可以直接跟載體蛋白進行偶聯,制備完全的人工抗原(如偶聯原理圖1)。如果半抗原沒有可直接與載體共價連接的基團,或雖有活性基團但這些基團對維系半抗原的免疫特性和特征結構十分重要,或直接與載體蛋白連接后半抗原的特征結構易受載體的局部微化學環境或空間位阻的干擾影響機體的免疫反應,則必須要對......

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        • 大腸桿菌無細胞表達系統

          傳統的大腸桿菌表達系統經過不斷的改進優化,具有生產周期短、效率高、成本低等一系列的優點,但是也存在系統自身的缺陷性,除了無法完成真核蛋白的折疊與修飾外,至今人們利用該系統仍無法解決膜蛋白以及一些毒性蛋白表達,嚴重制約著大腸桿菌表達系統的應用。為彌補原核表達系統的不足,人們常用真核表達系統來表達重組蛋白,但是真核表達系統步驟繁瑣、周期長、蛋白產量低、費用高等一系列問題,也給真核表達系統的推廣應用設置了一個比較高的門檻。目前,隨著人們對蛋白表達系統研究的不斷深入,使得蛋白的無細胞表達從可能變成......

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        色亚洲五月天
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