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        • 多克隆抗體的詳細制備方法

          多克隆抗體(polyclonal antibody, pAb)是指用含有多個抗原決定簇的抗原免疫動物后刺激機體多個B細胞克隆產生針對多種抗原表位的不同抗體,得到的免疫血清含有多種抗體。多克隆抗體可應用于WB、IHC、Elisa、IP等實驗中,是生物醫學研究領域不可或缺的研究伙伴。下面我們會來介紹一下多克隆抗體的制備過程。1.免疫原的制備普通的大分子蛋白,通過分子克隆構建載體并在大腸桿菌中進行誘導表達獲得重組蛋白,純化鑒定后可直接作為免疫原。小分子蛋白或化合物等分子量小,需要偶聯載體對該分子進行改造才能使其成為具有免疫原性的抗原......

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        • 競爭抑制ELISA檢測原理

          競爭抑制ELISA法是指將特異性抗體吸附于固相載體,隨后加入待測抗原(標準品和樣本)和一定量的生物素標記的抗原(檢測液A),使二者競爭與固 相抗體結合,溫育后經洗滌去掉未結合物,然后加入HRP標記的親和素,經過溫育和徹底洗滌后加入底物 TMB 顯色。TMB 在過氧化物酶的催化下轉化成藍色,并在酸的作用下轉化成最終的黃色。待測標本濃度越高,標記抗原和抗體的結合就越受到抑制,顯色愈淺。顯色的深淺與酶量呈正相關,而與樣品中待測物質含量呈負相關。用酶標儀在450nm 波長下測定吸光度(O.D.值),計算樣品濃度。由于生物大分......

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        • 大腸桿菌重組蛋白純化方法

          分子克隆構建載體的最終目的是能夠將目的蛋白表達出來,常見的表達系 統有大腸桿菌表達系統,酵母表達系統,昆蟲細胞表達系統,植物表達系統以 及哺乳動物細胞表達系統。大腸桿菌表達系統具有遺傳背景清楚、操作簡單、 產量高、價格低等優點,是最常用的蛋白表達系統之一。重組蛋白的分離純化 是蛋白,抗體,Elisa 試劑盒研發與制備的基礎。常見的純化方法有離子交換層 析,親和層析,疏水作用層析,排阻層析,電泳等,但純化工作不僅要保證純 度,重復性,還要保證穩定性并控制成本。以下將以 E.coli 表達的重組蛋白為例, 給大家......

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        • 雙抗夾心法ELISA檢測原理

          雙抗夾心 ELISA 法是指將特異性針對待測抗原的抗體包被于 96 孔微孔板 中,制成固相載體,向微孔中分別加入標準品或標本,其中待測抗原與連接于 固相載體上的抗體結合,然后加入生物素化的針對待測抗原的抗體,形成夾心, 將未結合的生物素化抗體洗凈后,加入 HRP 標記的親和素,再次徹底洗滌后加 入 TMB 底物顯色。TMB 在過氧化物酶的催化下轉化成藍色,并在酸的作用下 轉化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的待測抗原呈正相關。用酶標儀在 450nm 波長下測定吸光度(O.D.值),用于樣本中待測抗原濃度測算。原理圖如下:

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        • ELISA法檢測細胞凋亡的優勢

          細胞凋亡,亦稱細胞程序性死亡,是細胞在一系列內源性基因的調控下發 生的自然或生理性死亡的過程。細胞凋亡與壞死是兩種完全不同的細胞死亡形 式,根據死亡細胞在形態學、生物化學和分子生物學上的差別,可以將二者區 別開來。傳統的檢測細胞凋亡的方法有很多種,主要包括:1. 細胞凋亡的形態學檢測,包括直接用光學顯微鏡、倒置顯微鏡、熒光顯 微鏡、共聚焦激光掃描顯微鏡或透射電子顯微鏡等觀察是否有凋亡小體;2. 磷脂酰絲氨酸外翻分析(AnnexinV 法),包括用標記了的 Annexin-V 作 為熒光探針,利用流式細胞儀或熒光顯微鏡來......

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        • Elisa常見樣本的處理方法(二)

          Elisa 是一種快速、靈敏、準確可靠的一種定量分析方法,樣本的處理對于 Elisa 實驗的成功有著舉足輕重的作用。樣本收集的時間、處理方法和保存都會 影響到 Elisa 實驗的結果。上節我們介紹了血液(血清、血漿),組織勻漿、細 胞裂解液、細胞培養上清等常見樣本的處理方法,這一節我們將會介紹皮膚組 織、尿液、糞便、肺泡灌洗液、唾液、腦脊液、胸腹水、前列腺液、精液、陰 道分泌物等特殊樣本的處理方法,供研究者參考。1、痰液1)選擇痰液中較為粘稠部分稱重,加兩倍于痰量的 0.1% DTT(二硫蘇糖醇), DTT 的主要作用是溶解粘液,......

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        • 云克隆的改良式酵母表達系統

          眾所周知,在基因工程領域,常用的表達系統共有三種,包括:原核表達系統 (大腸桿菌 E. coli 表達系統)、酵母表達系統(P. Pichia 表達系統)和哺乳動物細胞表 達系統。原核表達系統由于操作簡單、成本低廉、表達效率高等優點,被廣泛應用 于外源基因的蛋白表達。但同時,原核表達體系也有一些自身的缺點,比如容易形 成包涵體,不能進行翻譯后加工等等。為了盡量避免原核表達系統自身的不足,Cloud-Clone Corp.又另外開發建立了 酵母表達平臺。酵母表達外源基因具有一定的翻譯后加工能力,收獲的外源蛋白質 具有一定程度上的折疊加工......

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        • ELISA試劑盒的穩定性試驗

          ELISA 試劑盒(簡稱試劑盒)的穩定性是指試劑盒在生產企業規定界限內保 持其特性的能力。根據實驗的目的和條件不同,穩定性試驗可分為加速穩定性試驗 和長期試驗。加速穩定性試驗,通常在 37 度下進行,用于加快試劑盒中的生物試劑的化學 或物理變化速度考察試劑盒的穩定性??蓪υ噭┖性谶\輸、保存過程中可能會遇到 的短暫的超常條件下的穩定性進行模擬考察,并初步預測試劑盒在規定的儲存條件 下長時間的穩定性。取有效期內的試劑盒,在 37 度分別破壞 24 小時和 72 小時,檢測試劑盒的回 收率、線性和精密度,判斷試劑盒的有效性......

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        色亚洲五月天
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